JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:23 min. • July 8th, 2025
Aby dostarczyć plazmidy do jąder sporozoitów przez nukleofekcję, należy rozpocząć od zawieszenia izolowanych, żywotnych sporozoitów - ruchliwego, zakaźnego stadium pasożytów - w buforze. Sporozoity to smukłe komórki otoczone zewnętrzną błoną plazmatyczną i leżącym pod nią kompleksem błony wewnętrznej, składającym się z szeregu spłaszczonych pęcherzyków i białek krytycznych dla stabilności strukturalnej i ruchliwości.
Odwirować zawiesinę w celu granulacji sporozoitów. Zawiesić osad sporozoitu w odpowiedniej objętości buforu transfekcji jądrowej, uzupełnionego plazmidami kodującymi białka fluorescencyjne. Bufor transfekcji jądrowej o wysokiej pojemności buforowej i sile jonowej zapewnia wydajną transfekcję przy zachowaniu funkcjonalności sporozoitu.
Przenieść zawiesinę do kuwety transfekcji jądrowej. Umieść kuwetę w uchwycie urządzenia do nukleofekcji. Uruchom odpowiedni program nukleofekcji.
Podczas nukleofekcji, specjalnie zastosowanej, krótkie impulsy wysokiego napięcia, wraz ze składnikami buforowymi, tymczasowo przerywają błonę plazmatyczną i kompleks błony wewnętrznej, tworząc pory transbłonowe, które zapewniają plazmidom dostęp do cytoplazmy.
Jednocześnie te pola elektryczne o
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych