JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:16 min. • July 8th, 2025
Aby wykonać transfekcję, weź specjalistyczną komorę zawierającą świeżo zapłodnione jaja myszy zawieszone w kropli odpowiedniego podłoża. Na tym etapie komórka jajowa zawiera duży centralny oocyt zawierający zarówno przedjądrze ojcowskie, jak i matczyne.
Oocyt jest pokryty bogatą w glikoproteiny osłoną przejrzystą, otoczoną ściśle ułożonymi skupiskami komórek wzgórka osadzonych w bogatej w kwas hialuronowy macierzy zewnątrzkomórkowej. Teraz potraktuj jaja enzymem hialuronidazą, który trawi kwas hialuronowy. To dysocjuje komórki wzgórka, ostatecznie odsłaniając osłonkę przejrzystą otaczającą oocyt.
Umieść pojedynczy leczony oocyt w pobliżu końcówki pipety trzymającej i zastosuj nacisk ssania, aby ograniczyć jego położenie. Weźmy igłę do mikroiniekcji o wąskim otworze zawierającą zmodyfikowaną zawiesinę wektora lentiwirusowego przenoszącą transgen zamknięty w otoczce wirusa. Te retrowirusy mają wrodzoną zdolność do integracji z genomem gospodarza.
Następnie przebij igłę przez osłonkę przejrzystą, aby dotrzeć do przestrzeni perivitelinowej - przestrzeni między najbardziej zewnętrzną osłoną przejrzystą a najbardziej wewnętrzną błoną plazmatyczną. Wprowadzić zawiesinę wektora lentiwiruso
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych