Wspomagane laserowo dostarczanie genów lentiwirusowych: technika przenikania zapłodnionych jaj myszy w celu ułatwienia dostarczania genów lentiwirusowych

Wspomagane laserowo dostarczanie genów lentiwirusowych to technika przenoszenia transgenu do systemu gospodarza.

Aby wyprodukować myszy transgeniczne, zacznij od izolowanych jaj zapłodnionych myszami w odpowiednim pożywce hodowlanej. Umieść zapłodnioną miskę hodowlaną zawierającą jaja na stoliku mikroskopowym, wstępnie zainstalowanym z aparatem laserowym i podłączonym do oprogramowania sterującego. Obserwuj przy odpowiednim powiększeniu.

Zapłodnione jaja są otoczone osłonką przejrzystą, ochronną warstwą glikoproteiny, która barieruje cząsteczki lentiwirusa. Aby przeniknąć przez tę barierę, włącz aparat laserowy i upewnij się, że dioda LED lasera jest widoczna ponad osłoną przejrzystą. Za pomocą oprogramowania sterującego odpal laser. Dostosuj czas wypalania do żądanej średnicy perforacji.

Umieść jaja w inkubatorze w celu wyzdrowienia. Po krótkiej inkubacji usuń jaja i dodaj cząsteczki lentiwirusa zawierające interesujący nas gen i fluorescencyjny marker selekcyjny.

Przy perforacji osłonki przejrzystej lentiwirus łatwo dyfunduje w kierunku błony komórki jajowej i wnika przez endocytozę. Lentiwirus rozpada się, uwalniając swoje RNA, które po sekwencyjnym przetworzeniu na dwuniciowy D