Transfer genów za pośrednictwem biolistyki: technika dostarczania interesującego genu do komórek docelowych za pomocą biolistycznego pistoletu genowego

Zacznij od optymalnej ilości złotych kulek - biologicznie obojętnych i nietoksycznych nośników genów - w probówce do mikrowirówki. Następnie dodaj środki kationowe - spermidynę i chlorek wapnia, a następnie pożądane fragmenty DNA do złotych koralików. Delikatnie przesuń probówkę i rozpocznij inkubację.

Chlorek wapnia wiąże się z fragmentami DNA i ułatwia ich powlekanie złotymi kulkami za pomocą reszt spermidyny. Następnie odwirować i usunąć rozpuszczalnik. Ponownie zawiesić kulki pokryte DNA w etanolu. Delikatnie odpipetować kulki na sterylnym krążku makronośnikowym. Pozostaw do wyschnięcia.

Ustawić biolistyczny pistolet genowy składający się z rurki rozpędzającej hel i komory bombardowania z płytką bezpieczeństwa i ekranem zatrzymującym w odpowiednich miejscach. Następnie odwróć krążek makronośny i załaduj go poniżej płytki bezpieczeństwa.

Następnie umieść docelowe komórki gospodarza hodowane w odpowiednim stałym podłożu uzupełnionym sorbitolem - stabilizatorem osmotycznym w celu poprawy wydajności transformacji. Gdy konfiguracja będzie gotowa, odpal pistolet genowy.

Gdy hel przemieszcza się w dół rury przyspieszającej, ciśnienie nadal rośnie, aż do pęknięcia płytki pęknięcia, two