Transfekcja in vitro oparta na magnetofekcji: technika wspomagana polem magnetycznym dostarczania plazmidów do pierwotnych komórek neuronalnych myszy za pomocą nanocząstek magnetycznych

Zacznij od fluorescencyjnego kodowania białka plazmidowego DNA lub zawiesiny pDNA w pożywce. Dodaj biokompatybilne, pokryte kationowym polimerem nanocząstki magnetyczne do zawiesiny pDNA i inkubuj.

Dodatnio naładowane polimery kationowe oddziałują elektrostatycznie i sprzęgają się z ujemnie naładowanym pDNA, powodując kondensację pDNA i tworzenie "magnetycznych polipleksów" o ogólnym ładunku dodatnim.

Teraz przenieś mieszaninę polipleksów na wielodołkową płytkę zawierającą przylegającą pierwotną hodowlę komórek neuronalnych myszy. Zamontuj płytkę wielodołkową na płytce magnetycznej i inkubuj.

Pole magnetyczne generowane przez płytę magnetyczną powoduje, że polipleksy osadzają się i gromadzą na powierzchni komórki neuronalnej. Ten bliski kontakt z powierzchnią komórki ułatwia niespecyficzne wiązanie dodatnio naładowanych polipleksów z ujemnie naładowanymi proteoglikanami związanymi z błoną komórkową.

Następnie polipleksy ulegają internalizacji poprzez endocytozę - proces, w którym lokalne obszary błony komórkowej wnikają i szczypią się, tworząc pęcherzyki związane z błoną zwane endosomami.

Wewnątrz cytoplazmy polimery kationowe polipleksu indukują akumulację protonów w endosomie. Je