Barwienie von Kossy komórek mięśni gładkich naczyń aorty: technika in vitro do oceny zwapnienia przyśrodkowej warstwy tętniczej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:10 min. • July 8th, 2025
Komórki mięśni gładkich naczyń krwionośnych (VSMC) są głównymi składnikami komórkowymi osłonki środkowej - środkowej warstwy ściany naczynia krwionośnego. W odpowiedzi na patologiczne sygnały lub starzenie się komórki te pośredniczą w zwapnieniu naczyń krwionośnych - zjawisku akumulacji wapnia w macierzy zewnątrzkomórkowej.
Weź płytkę wielodołkową zawierającą przylegającą warstwę wstępnie zwapniałej, mysiej hodowli VSMC aorty. Inkubuj komórki z roztworem formaliny, aby usieciować białka komórkowe i ustabilizować strukturę VSMC przed barwieniem.
Rozpocznij barwienie von Kossa, odsysając formalinę ze studzienki i dodając roztwór azotanu srebra. Inkubować płytkę pod odpowiednim źródłem światła.
Gdy roztwór azotanu srebra dotrze do miejsc zwapnienia w macierzy zewnątrzkomórkowej warstwy VSMC, jony srebra zastępują jony wapnia związane z fosforanem. Powoduje to przejściowe żółte zabarwienie. W obecności materii organicznej i światła fotochemiczna degradacja fosforanu srebra powoduje tworzenie się metalicznego srebra w kolorze czarnym.
Wyrzuć maksymalną ilość zużytego roztworu azotanu srebra. Potraktuj komórki roztworem tiosiarczanu sodu. Roztwór ten przekształca resztkowe sole srebra w
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych