Barwienie ujemne próbek wirusów na siatkach TEM za pomocą kapsułek: technika barwienia metalami ciężkimi w celu wizualizacji ultrastruktury wirusów otoczkowych

W przypadku ujemnego barwienia wirusów otoczkowych należy rozpocząć od pożądanej zawiesiny wirusowej. Inkubuj wirusy za pomocą aldehydu glutarowego, chemicznego utrwalacza. Po penetracji aldehyd glutarowy sieciuje białka wirusowe i kwasy nukleinowe, inaktywując wirusy przy jednoczesnym zachowaniu morfologii, ułatwiając w ten sposób bezpieczne obchodzenie się z wirusem. Przenieś tę mieszaninę na płytkę wielodołkową.

Podłączyć transmisyjną mikroskopię elektronową, TEM, siatki zawierające kapsułkę do pipety za pomocą łącznika. Za pomocą pipety odessać mieszaninę utrwalającą wirusa do kapsułki. Przeprowadzić inkubację zespołu pipet, aby wirusy mogły adsorbować się na powierzchni siatki.

Usuń mieszaninę. Umyj kapsułkę, usuwając nieprzylegające wirusy i utrwalacze. Do kapsułki należy wprowadzić pipetą roztwór octanu uranylu, barwnika na bazie metali ciężkich. Inkubować, aby plama mogła zetknąć się z wirusami.

Jony uranylowe wiążą się ze specyficznymi glikoproteinami błonowymi i fosfolipidami na powierzchni wirusa. Jony mogą przenikać do wirusów i wiązać się z białkami nukleokapsydu otaczającymi genom. To wiązanie indukuje agregację i odkładanie jonów metali ciężkich wokół wirusa i określ