Barwienie eozyną próbek tkanek miękkich: oparta na eozynie procedura barwienia nerek całych myszy w celu wizualizacji określonych mikrostruktur tkanek

0 wyświetleń3:14 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W przypadku barwienia specyficznego dla cytoplazmy komórkowej w mikrośrodowiskach tkanek miękkich należy uzyskać świeżo pobraną nerkę myszy. Potraktuj go roztworem utrwalającym zawierającym formaldehyd, lodowaty kwas octowy i metanol. Inkubować w niskich temperaturach.

Formaldehyd wnika do komórek, sieciując białka z białkami i białka z kwasami nukleinowymi. Metanol wypiera wodę z tkanki i koaguluje białka. Kwas octowy powoduje wewnątrzkomórkowe zakwaszenie i obrzęk tkanek, przeciwdziałając w ten sposób obkurczaniu się tkanek wywołanemu przez metanol.

Utrwalenie dezaktywuje enzymy i stabilizuje morfologię tkanek do późniejszego barwienia. Usunąć nadmiar utrwalaczy za pomocą bufora. Inkubuj tkankę z eozyną Y, kwaśnym barwnikiem.

Eozyna przenika do utrwalonych komórek i wnika do cytoplazmy. Kwaśne środowisko cytoplazmy, po leczeniu kwasem octowym, powoduje maksymalne protonowanie grup aminowych białek cytoplazmatycznych.

Eozyna, z ujemnie naładowanymi grupami funkcyjnymi, oddziałuje elektrostatycznie z protonowanymi grupami białek, tworząc stabilny kompleks barwnikowo-białkowy i po akumulacji barwi cytoplazmę na różowo. Po inkubacji pokrój wybarwioną nerkę na małe kawałki, a następnie odwodnij tkanki w celu zwiększenia stężenia etanolu.

Osadź tkankę nerkową w wosku parafinowym. Uzyskaj cienkie skrawki tkanek za pomocą mikrotomu. Następnie ponownie uwodnić skrawki do analizy mikroskopowej.

Niebarwione jądra komórkowe wydają się białe na tle zabarwionej na różowo cytoplazmy, co umożliwia wizualizację mikrostruktur nerkowych, takich jak proksymalne kanaliki kręte, zawierające komórki nabłonkowe z obrzeżami szczoteczek lub przewody zbiorcze, które są wyłożone spłaszczonymi komórkami nabłonkowymi bez obramowań szczoteczki.

Zacznij od utrwalenia próbek tkanek miękkich. Napełnij 50-mililitrową probówkę wirówkową roztworem utrwalającym zawierającym 9,5 mililitra 4% formaldehydu i 0,5 mililitra lodowatego kwasu octowego. Dodaj próbkę tkanek miękkich do probówki wirówkowej i wstaw do lodówki na 24 do 72 godzin.

Po schłodzeniu przemyć próbkę tkanek miękkich roztworem DPBS przez 1 godzinę. Następnie wybarwić próbkę, umieszczając ją w 2 mililitrach roztworu barwiącego eozynę Y i inkubować na poziomej płytce wstrząsającej przez 24 godziny.

Następnego dnia ostrożnie wyjmij próbkę tkanek miękkich z pojemnika na próbkę i usuń nadmiar środka barwiącego bibułą celulozową. Umieść go w stożkowym pojemniku nad fazą parową etanolu do przechowywania i dalszego wykorzystania.

07:41

Sztywne osadzanie utrwalonych i barwionych, całych próbek w skali milimetrowej do bezsekcyjnej histologii 3D za pomocą mikrotomografii komputerowej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:06

Zastosowanie mikrorentgenowskiej tomografii komputerowej z preparatem kwasu fosfowolframowego do wizualizacji ludzkiej tkanki włóknisto-mięśniowej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:09

Mikrodysekcja podregionów glejaka do wychwytywania laserowego w celu przestrzennej i molekularnej charakterystyki heterogeniczności wewnątrznowotworowej, onkostrumieni i inwazji

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:43

Obrazowanie fluorescencyjne kolonizacji bakteryjnej w tkance nerek myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:43

Technika barwienia całego narządu do trójwymiarowego obrazowania nerki

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:16

Hodowla narządów i barwienie immunofluorescencyjne całego wierzchowca mysich przewodów Wolffa

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:22

Echokardiograficzne i histologiczne badanie morfologii serca u myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:37

Izolacja, fiksacja i obrazowanie immunofluorescencyjne nadnerczy myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:18

Optyczne oczyszczanie i obrazowanie znakowanej immunologicznie tkanki nerki

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:01

Obrazowanie 3D próbek tkanek miękkich przy użyciu metody barwienia specyficznego dla promieniowania rentgenowskiego i nanoskopowej tomografii komputerowej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026