JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:14 min. • July 8th, 2025
W przypadku barwienia specyficznego dla cytoplazmy komórkowej w mikrośrodowiskach tkanek miękkich należy uzyskać świeżo pobraną nerkę myszy. Potraktuj go roztworem utrwalającym zawierającym formaldehyd, lodowaty kwas octowy i metanol. Inkubować w niskich temperaturach.
Formaldehyd wnika do komórek, sieciując białka z białkami i białka z kwasami nukleinowymi. Metanol wypiera wodę z tkanki i koaguluje białka. Kwas octowy powoduje wewnątrzkomórkowe zakwaszenie i obrzęk tkanek, przeciwdziałając w ten sposób obkurczaniu się tkanek wywołanemu przez metanol.
Utrwalenie dezaktywuje enzymy i stabilizuje morfologię tkanek do późniejszego barwienia. Usunąć nadmiar utrwalaczy za pomocą bufora. Inkubuj tkankę z eozyną Y, kwaśnym barwnikiem.
Eozyna przenika do utrwalonych komórek i wnika do cytoplazmy. Kwaśne środowisko cytoplazmy, po leczeniu kwasem octowym, powoduje maksymalne protonowanie grup aminowych białek cytoplazmatycznych.
Eozyna, z ujemnie naładowanymi grupami funkcyjnymi, oddziałuje elektrostatycznie z protonowanymi grupami białek, tworząc stabilny kompleks barwnikowo-białkowy i po akumulacji barwi cytoplazmę na różowo. Po inkubacji pokrój wybarwioną nerkę na małe kawałki, a następni
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych