Barwienie błękitem metylenowym w celu oceny tworzenia się kolonii przerzutowych in vitro: procedura barwienia w celu oceny przerzutów poprzez ilościowe oznaczanie pobranych komórek rakowych z mysiego modelu raka

Podczas przerzutów nowotworowych komórki nowotworowe z guza pierwotnego przemieszczają się przez układ krążenia, wynaczyniają się do odległych narządów i tworzą guzy wtórne.

Aby ocenić przerzuty do płuc w mysim modelu raka piersi, któremu wstrzyknięto komórki 4T1, wysoce przerzutowe komórki raka piersi, należy przygotować zawiesinę komórkową, w tym komórki 4T1, wyizolowaną z pobranych płuc. Odwirować zawiesinę i ponownie zawiesić komórki w pożywce zawierającej 6-tioguaninę, 6-TG - analog guaniny. Wysiewaj zawiesinę komórkową na płytce hodowlanej.

6TG dostaje się do normalnych komórek, gdzie specyficzny enzym transferazy przekształca go w nukleotyd 6-TG, toksyczny nukleotyd. Te cytotoksyczne nukleotydy włączają się do DNA, powodując uszkodzenie DNA i selektywnie eliminują komórki z hodowli. Komórki 4T1 mają zmniejszoną zdolność do tworzenia toksycznych nukleotydów, co ułatwia ich przetrwanie i przyleganie do płytki. W zależności od zdolności proliferacyjnych komórek tworzą kolonie.

Potraktuj komórki metanolem. Metanol przenika do komórek i denaturuje białka komórkowe. Inkubuj komórki z błękitem metylenowym.

Dodatnio naładowany barwnik dostaje się do komórki, oddziałuje z ujemnie nał