Barwienie skrawków tkanek fioletem krezylowym: procedura barwienia mająca na celu uwidocznienie chrząstki i kości w zamrożonych skrawkach zarodków myszy

0 wyświetleń3:32 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aby uwidocznić obszary chrząstki i kości w sekcji tkanki, zacznij od szklanego szkiełka zawierającego cienki zamrożony wycinek tkanki zarodka myszy, który Cię interesuje.

Krótko rozmrozić kriosekcję i zanurzyć ją w etanolu o odpowiednim stężeniu, aby usunąć podłoże do zatapiania w krioterapii. Etap usuwania pomaga zapobiec poluzowaniu podłoża, które w przeciwnym razie mogłoby wpłynąć na wizualizację tkanki podczas barwienia. Dodatkowo etanol utrwala tkankę, utrzymując morfologię i integralność tkanki.

Następnie odpipetuj roztwór fioletu krezylowego na tkankę. Fiolet krezylowy, dodatnio naładowany, zasadowy barwnik, wiąże się z ugrupowaniami polianionowymi, takimi jak proteoglikany w macierzy tkanki chrzęstnej. Natomiast w tkankach zmineralizowanych, takich jak kości, reaguje z ujemnie naładowanymi grupami, takimi jak grupy fosforanowe w macierzy kostnej.

Będąc barwnikiem metachromatycznym, fiolet krezylowy barwi różne obszary tkanki w kolorach różniących się od naturalnego barwnika w oparciu o jego interakcję z różnymi składnikami chemicznymi w tych regionach.

Teraz umyj chusteczkę w odpowiednim stężeniu etanolu, aby usunąć nadmiar plam. Zanurz tkankę w rosnącym stężeniu etanolu, aby zastąpić wodę z tkanki, odwadniając tkankę. Umyj tkankę ksylenem, aby wyprzeć etanol, dzięki czemu tkanka będzie przezroczysta do mikroskopii.

Pod mikroskopem świetlnym tkanka chrzęstna wydaje się purpurowa, podczas gdy tkanka kostna wydaje się brązowa, co ułatwia ich różnicowanie od siebie, a także od otaczającej tkanki.

Przygotuj trzy oznakowane 50-mililitrowe probówki wirówkowe. Dodaj 45 mililitrów 80% etanolu do każdej tubki. Umieść trzy rurki na lodzie. Umieść probówkę zawierającą 45 mililitrów 95% etanolu i probówkę zawierającą 100% etanolu na lodzie. Następnie dodaj 45 mililitrów ksylenu do 50-mililitrowej probówki wirówkowej w temperaturze pokojowej.

Rozmrozić na krótko szkiełko membranowe PEN, przykładając je do dłoni w rękawiczce, a następnie umyć je dwukrotnie przez 30 sekund w każdej z probówek zawierających 80% etanolu z mieszaniem, aby usunąć związek o optymalnej temperaturze cięcia. Następnie połóż szkiełko na arkuszu folii aluminiowej. Odpipetować 0,8 mililitra 0,1% fioletu krezylowego w 50% etanolu na szkiełko i barwić przez 30 sekund.

Myć szkiełko w trzeciej probówce zawierającej 80% etanolu przez 30 sekund. Odwodnić szkiełko, przepuszczając je przez probówkę zawierającą 95% etanolu przez 30 sekund, probówkę zawierającą 100% etanolu przez 30 sekund, a na koniec probówkę zawierającą ksylen przez 30 sekund. Następnie umieść szkiełka na delikatnej wycieraczce roboczej na 5 minut, aby ksylen spłynął i pozostawił sekcje do wyschnięcia.

10:26

Obrazowanie neuronów w grubych sekcjach mózgu metodą Golgiego-Coxa

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:29

Stereotaktyczne przechwytywanie laserowe pod kontrolą atlasu Mikrodysekcja obszarów mózgu dotkniętych urazem urazowym

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:09

Mikrodysekcja podregionów glejaka do wychwytywania laserowego w celu przestrzennej i molekularnej charakterystyki heterogeniczności wewnątrznowotworowej, onkostrumieni i inwazji

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:58

Metoda oznaczania naczyń krwionośnych u myszy embrionalnych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:41

Kriokonserwowane utrwalanie i barwienie skrawków tkanek: procedura przetwarzania zamrożonych skrawków tkanki mózgowej do mikrodysekcji laserowej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:46

Barwienie immunologiczne tkanek twarzoczaszki myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:31

Zautomatyzowana kwantyfikacja interakcji komórek krwiotwórczych – komórek zrębu w obrazach histologicznych kości nieodwapnionej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:03

Przygotowanie tkanek i barwienie immunologiczne tkanek twarzoczaszki myszy i kości nieodwapnionej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:41

Klonalne śledzenie genetyczne przy użyciu myszy konfetti do badania zmineralizowanych tkanek

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:20

Laserowe wychwytywanie mikrodysekcji chrząstki embrionalnej i kości myszy w celu analizy ekspresji genów

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026