JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:32 min. • July 8th, 2025
W niejednorodnej populacji komórek nowotworowych leczenie lekiem przeciwnowotworowym zabiłoby większość komórek, ale komórki oporne na leki przeżywają, co prowadzi do niepowodzenia terapeutycznego.
Aby określić proporcję komórek opornych na leki, należy zasiać heterogeniczną populację komórek nowotworowych na płytce wielodołkowej. Inkubować, aby ułatwić przyleganie komórek. Dodać rosnące stężenie odpowiedniego roztworu leku przeciwnowotworowego.
Interakcja z cząsteczkami leku powoduje obumieranie wrażliwych komórek, a następnie odklejanie się od płytek hodowlanych. W przeciwieństwie do tego, komórki oporne na leki przeżywają i pozostają przyczepione do płytki.
Odessać zużytą pożywkę, aby usunąć oderwane komórki. Dodać świeżą pożywkę wolną od leków i inkubować płytkę w warunkach fizjologicznych. Komórki oporne na leki namnażają się i tworzą kolonie nowotworowe. Teraz dodaj roztwór barwiący fiolet krystaliczny do kolonii i inkubuj.
Fiołek krystaliczny, fioletowy, przepuszczalny przez błonę, dodatnio naładowany barwnik wnika do komórek i wiąże białka anionowe i DNA, nadając w ten sposób komórkom fioletowy kolor.
Następnie dodaj etanol, aby rozpuścić nieprzereagowaną plamę. Umyj, aby u
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych