JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:37 min. • July 8th, 2025
Enocyty larwalne Drosophila to wyspecjalizowane komórki, które przyczepiają się w postaci dyskretnych skupisk na podstawowej powierzchni bocznego naskórka - powierzchownej warstwie skóry. Te enocyty biorą przede wszystkim udział w metabolizmie lipidów.
Podczas głodu enocyty te gromadzą nadmiar kropelek lipidów. Każda kropla składa się z hydrofobowego rdzenia z obojętnych lipidów, takich jak trójglicerydy i estry cholesterolu, otoczonych monowarstwą fosfolipidów.
Aby uwidocznić kropelki lipidów, należy pobrać wypreparowany fragment naskórka larw Drosophila z dołączonymi enocytami. Potraktuj buforem utrwalającym zawierającym paraformaldehyd, aby usieciować białka komórkowe, takie jak proteazy, i zachować integralność strukturalną enocytów. Usuń bufor utrwalający. Inkubuj z fluorescencyjnym barwnikiem na bazie BODIPY w ciemności, aby uniknąć fotowybielania.
Podczas inkubacji niepolarny barwnik dyfunduje przez błonę komórkową enocytów i przenika przez monowarstwę otaczającą kropelki lipidów. Hydrofobowość cząsteczek barwnika umożliwia ich przemieszczanie się do niepolarnego rdzenia kropelek lipidów w celu związania obojętnych lipidów.
Zamontuj próbkę na szkiełku tak, aby enocyty dotyka
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych