Barwienie czerwienią alizaryny: technika wizualizacji mineralizacji przez hodowane osteoblasty

Osteoblasty to komórki kościotwórcze, które wydzielają małe pęcherzyki do swojej macierzy zewnątrzkomórkowej, ECM. Pęcherzyki te, zwane pęcherzykami macierzowymi, są wyposażone w transportery błonowe i enzymy, które umożliwiają wejście jonów wapniowych i fosforanowych, tworząc w nich kryształy mineralne. Gdy kryształy się gromadzą, przebijają się przez błonę pęcherzyków, tworząc zmineralizowane guzki w ECM, składające się na gęstość mineralną kości.

Aby zobrazować mineralizację, zacznij od komórek osteoblastów na biokompatybilnym rusztowaniu w odpowiednim pożywce wzrostowej. Osteoblasty przyczepiają się do rusztowania i wykorzystują czynniki wzrostu z pożywki do wydzielania pęcherzyków macierzy, które następnie tworzą zmineralizowane guzki w ECM.

Odessać pożywkę hodowlaną i przepłukać komórki, aby usunąć wszelkie ślady pożywki. Potraktuj komórki roztworem formaliny, który indukuje sieciowanie, utrwalanie i zachowanie struktury tkanki ECM. Umyj komórki, aby usunąć pozostałą formalinę.

Następnie dodaj roztwór barwiący Alizarin Red i inkubuj kulturę. Cząsteczki barwnika wiążą się ze zmineralizowanym guzkiem i łączą się z wapniem, kluczowym minerałem kości, tworząc duże barwione komple