Barwienie Giemsa do testu tworzenia kolonii: procedura barwienia in vitro w celu oceny zdolności proliferacyjnej mezenchymalnych komórek macierzystych

0 wyświetleń • 2:52 min. • July 8th, 2025

Testy tworzenia kolonii mierzą zdolność komórek do proliferacji do wzrostu w kolonie.

Po pierwsze, zawiesina komórek pochodzących ze szpiku kostnego nasienna składająca się z erytrocytów i komórek jednojądrzastych, w tym mezenchymalnych komórek macierzystych lub MSC, w pożywce na płytce hodowlanej i inkubacji. MSCs przylegają do dna płytki, podczas gdy erytrocyty i komórki jednojądrzaste pozostają w zawiesinie i są odrzucane.

Dodaj świeże pożywki zawierające czynniki wzrostu, aby wspomóc przeżycie MSC. W zależności od ich indywidualnego potencjału proliferacyjnego, MSCs replikują się, tworząc kolonie.

Następnie potraktuj kolonie metanolem. Metanol przenika do komórek, wypiera wodę ze środowiska wewnątrzkomórkowego i denaturuje białka, zachowując architekturę komórkową.

Inkubuj utrwalone kolonie roztworem barwiącym Giemsa - mieszaniną produktów utleniania błękitu metylenowego, głównie lazuru B, barwnika zasadowego i eozyny Y, barwnika kwaśnego. Po dyfuzji do komórek dodatnio naładowane lazurowe dimery B wiążą się poprzez interkalację z ujemnie naładowanym DNA w jądrze, nadając niebieskie zabarwienie.

Ujemnie naładowane monomery eozyny Y oddziałują następnie z niezneutralizowanymi ła

Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych

Zaloguj się

Przeglądaj więcej filmów

Fiksacja metanolem