JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 2:42 min. • July 8th, 2025
Proteoglikany składają się z białka rdzeniowego kowalencyjnie przyłączonego do siarczanowych łańcuchów glikozaminoglikanów.
Aby uwidocznić proteoglikany, zacznij od rusztowań na bazie kolagenu - porowatego podłoża polimerowego - i umieść na nich zawiesinę mezenchymalnych komórek macierzystych lub MSC. Zapewnia to strukturalne wsparcie dla MSC i pozwala im rosnąć zarówno na powierzchni, jak i wewnątrz wnęk rusztowań.
Traktuj konstrukty w chondrogennej pożywce różnicującej zawierającej transformujące czynniki wzrostu, które napędzają transformację MSCs w dojrzałe chondrocyty - komórki chrzęstne. Dojrzałe chondrocyty wydzielają proteoglikany, które tworzą sieć z kolagenem w rusztowaniu.
Weź wycinek przygotowany z konstruktu obciążonego chondrocytami. Dodać kwaśny roztwór niebieskiej plamy alcian uzupełniony chlorowodorkiem guanidu i inkubować. Podczas inkubacji chlorowodorek guanidyny w roztworze barwnika dysocjuje wszelkie agregaty proteoglikanów w celu lepszego barwienia.
Następnie ujemnie naładowane siarczanowane glikozaminoglikany z proteoglikanów wiążą się z dodatnio naładowanymi cząsteczkami barwnika alcian blue zawierającymi miedź, powodując powstawanie niebieskich osadów.
Nast
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych