JoVE Encyclopedia of Experiments
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 2:50 min • July 8th, 2025
Nabłonek jajowodu składa się z komórek wydzielniczych, które wytwarzają płyn bogaty w składniki odżywcze, oraz komórek rzęskowych, które napędzają skąpane w płynie komórkę jajową w kierunku macicy. Zmiany morfologiczne i utrata funkcji w komórkach jajowodów są związane z rakiem jajowodu.
Aby zobrazować morfologię jajowodów, weź szkiełko rozmazane tkankami i zanurz je w etanolu, aby ustalić jego cechy cytologiczne. Opłucz szkiełko w wodzie, aby usunąć nadmiar utrwalacza.
Teraz zanurz szkiełko w hematoksylinie, kationowym barwniku, który wiąże ujemnie naładowane DNA, barwiąc jądro na niebiesko. Opłucz szkiełko wodą, a następnie etanolem, aby zapobiec nadmiernemu przebarwieniu.
Następnie zanurz szkiełko w barwniku Eosin Azure - polichromowanym roztworze brązu Bismarcka, Eozyny Y i Szybkiej zieleni zmieszanym z kwasem fosfowolframowym. Brąz Bismarcka wytrąca kwas fosfowolframowy, zaprawę używaną przez Eozynę Y, oraz Fast Green do zróżnicowanego barwienia nienowotworowych komórek jajowodów i metabolicznie aktywnych komórek rakowych.
Powtórz etap płukania wodą i alkoholem. Na koniec zanurz szkiełko w ksylenie - środku czyszczącym, który usuwa nadmiar składników plamy. Następnie zamontuj szkiełko i zwizualizuj je pod mikroskopem.
Prawidłowy nabłonek jajowodu pojawia się jako zorganizowana warstwa jasnoniebieskich komórek barwionych, rzęskowych i wydzielniczych. Natomiast złośliwe komórki w nabłonku pojawiają się jako skupiska komórek z ciemnymi jądrami.
Przed barwieniem komórek należy załadować fiolkę z próbką do automatycznego procesora w celu przygotowania szkiełek. Gdy szkiełka są gotowe, zanurz próbki w 95% etanolu, 10 razy, na 1 sekundę na zanurzenie, a następnie 10 zanurzeń w wodzie, na 1 sekundę na zanurzenie.
Następnie zanurz szkiełka w hematoksylinie na 10 do 60 sekund, a następnie wykonaj drugie płukanie wodą i etanolem. Po ostatnim zanurzeniu w etanolu zanurz szkiełka w Eosin Azure na 1 do 3 minut, a następnie ponownie przepłucz wodą na etanol. Następnie zanurz szkiełka w ksylenie; do momentu, gdy próbki staną się klarowne.