JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 2:49 min. • July 8th, 2025
Zwłóknienie to zwiększone odkładanie się kolagenu fibrylarnego w macierzy zewnątrzkomórkowej uszkodzonej tkanki. Strukturalnie składa się z łańcuchów polipeptydowych kolagenu potrójnej helisy.
Aby zabarwić kolagen czerwonym barwnikiem Picrosirius, weź utrwalony paraformaldehydem, zatopiony w parafinie wycinek tkanki serca. Zanurz wycinek tkanki w ksylenie - rozpuszczalniku organicznym - aby rozpuścić otaczający wosk.
Sekwencyjnie traktować odparafinowaną tkankę zmniejszającymi się stężeniami alkoholu w celu zastąpienia ksylenu. Zanurz tkankę w wodzie, aby ją nawodnić w celu lepszej wizualizacji plam w kolejnych krokach.
Zanurz tkankę w czerwonym roztworze picrosiriusa zawierającym czerwień Sirius - anionowy barwnik azowy - i kwas pikrynowy.
Czerwień Syriusza zawiera kwaśne grupy sulfonowe, które oddziałują z podstawowymi grupami aminowymi lizyny, hydroksylizyny i argininy obecnymi w kolagenie. Kwas pikrynowy pomaga utrzymać kwaśne pH, ułatwiając wiązanie cząsteczek barwnika w orientacji równoległej do kolagenu.
Opłucz szkiełka w zakwaszonym roztworze odbarwiającym, aby usunąć nadmiar plam. Umieść kroplę podłoża mocującego na szkiełku i obejrzyj go pod mikroskopem jasnego pola.
Obsz
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych