JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 2:30 min. • July 8th, 2025
W roślinach lignina - złożony biopolimer - jest zwykle odkładana w ścianach komórkowych tkanek w celu zapewnienia wsparcia.
Zdrewnienie występuje głównie w wtórnych zgrubieniach ściany komórkowej komórek ksylemu przewodzących wodę, takich jak naczynia i włókna, oraz komórek pozaksylowych, takich jak włókna międzypęczkowe.
Strukturalnie lignina składa się z usieciowanych prekursorów monolignolu. Te aromatyczne alkohole polimeryzują, tworząc silnie rozgałęzioną strukturę. Ta cecha zwiększa wytrzymałość i sztywność rośliny.
Aby zobrazować osadzanie ligniny za pomocą barwienia Wiesnera, należy wziąć przekroje poprzeczne łodyg dwuliściennych osadzonych w agarozie pochodzących ze środkowej lub dolnej części rośliny. Dodać je do probówki mikrowirówkowej zawierającej odpowiedni bufor.
Do odcinków łodyg dodać przygotowany roztwór bejcy, który zawiera zakwaszony floroglucynol i etanol. Alkohole obecne w ligninie reagują z floroglucynolem i etanolem, dając różowy pigment. Powoduje to rozwój różowego zabarwienia odpowiadającego odkładaniu się ligniny w ścianach komórkowych wyspecjalizowanych komórek.
Teraz przenieś zabarwiony fragment na mikroskopijne szkiełko. Delikatnie umieść szkiełko nakrywkowe na sekcji, unikając pęcherzyków, aby lepiej ją zobrazować. Wizualizuj przekroje pod mikroskopem świetlnym.
Różowe zabarwienie wyspecjalizowanych komórek ksylemu i włókien międzypęczkowych w przekrojach poprzecznych łodyg potwierdza obecność ligniny w tych tkankach.
W przypadku barwienia floroglucynolem przenieś sekcje łodygi do probówki mikrowirówkowej. Dodaj 1 mililitr roztworu floroglucynolu do probówki i natychmiast ją zakorkuj, ponieważ kwas solny w plamie floroglucynolu jest silnie. Delikatnie przesuń rurkę, aby upewnić się, że wszystkie sekcje są poplamione. Delikatnie odpipetuj skrawki do wyciętej końcówki pipety i na szkiełko mikroskopowe. Przykryj sekcje szkiełkiem nakrywkowym. Obserwuj sekcje przy jasnym oświetleniu. Roztwór wysycha w ciągu 5 do 10 minut, powodując pogorszenie jakości próbek, dlatego obrazowanie musi zostać zakończone w tym czasie.