Barwienie czerwienią Kongo: technika wizualizacji osadów celulozy w sekcjach łodyg roślin

Celuloza jest nierozgałęzionym polimerem jednostek β-glukozy połączonych wiązaniem β-1→4 i ułożonych równolegle za pomocą międzycząsteczkowych wiązań wodorowych.

Celuloza służy jako główny składnik strukturalny ściany komórkowej rośliny, nadając komórkom kształt i sztywność oraz ułatwiając wzrost i rozwój roślin. Proporcja celulozy w ścianie komórkowej różni się znacznie w całej roślinie, w zależności od typu komórki i etapu wzrostu.

Aby uwidocznić osadzanie się celulozy w łodydze, weź cienkie przekroje odcinków łodygi osadzonych w agarozie.

Dodaj czerwony barwnik fluorescencyjny Kongo i inkubuj sekcje.

Cząsteczki czerwieni kongijskiej wnikają w ścianę komórkową i tworzą wiązania wodorowe z grupami hydroksylowymi celulozy, ulegając w ten sposób adsorbcji na polimerze. To nadaje czerwony kolor naskórkowi, korze i rdzeniowi.

Cząsteczki barwnika dyfundują również w złożonych ścianach komórkowych ksylemu i włókien międzypęczkowych, przekraczając sztywną barierę ligniny, nadając w ten sposób również tym tkankom czerwony kolor.

Teraz spłucz sekcje w wodzie, aby usunąć nadmiar plamy. Przenieś skrawki na szkiełko mikroskopowe i umieść szkiełko nakrywkowe.

Podczas wizualizacji pod mikroskopem fluorescencyjnym naskórek, kora, rdzeń centralny, ksylem i włókna międzypęczkowe wydają się czerwone, co odpowiada zawartości celulozy.

W przypadku barwienia czerwienią Kongo przenieś sekcje łodygi do probówki mikrowirówki i dodaj 1 mililitr 0,5% roztworu czerwieni Kongo. Delikatnie odpipetować 0,5% roztwór czerwieni kongijskiej w górę i w dół, nie naruszając sekcji, przed inkubacją i umyciem skrawków zgodnie z opisem w protokole tekstowym. Delikatnie odpipetuj skrawki do odciętej końcówki pipety i na szkiełko mikroskopowe, a następnie przykryj je szkiełkiem nakrywkowym. Obserwuj próbki na szkiełku mikroskopowym pod wpływem wzbudzenia światłem niebieskim za pomocą filtra emisyjnego 560 nm.