JoVE Encyclopedia of Experiments
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 2:37 min • July 8th, 2025
W komórkach roślinnych ściana komórkowa, wyspecjalizowana warstwa ochronna, otacza błonę plazmatyczną. Ściana komórkowa składa się głównie z celulozy, liniowego, nierozgałęzionego polisacharydu monomerów glukozy połączonych od końca do końca wiązaniami β-1,4 glikozydowymi.
Celuloza występuje w stanie zagregowanym w postaci ortogonalnie ułożonych mikrowłókien celulozy, osadzonych w matrycy hemicelulozowej, pektynowej i białkowej.
Niektóre komórki, takie jak tkanka ksylemu naczyniowego i włókna międzypęczkowe, zawierają również ligninę, środek utwardzający, w swoich ścianach komórkowych.
Aby uwidocznić osadzanie się celulozy w ścianach komórkowych roślin, zacznij od osadzonych w agarozie przekrojów poprzecznych łodygi rośliny dwuliściennej w buforze. Dodać wodny roztwór bieli kalkofluorowej, chemifluorescencyjnego, płaskiego barwnika. Inkubować, aby barwnik mógł dyfundować do tkanki.
Po wejściu do środka biel kalkofluorowa poprzez swoje hydroksylowe grupy funkcyjne oddziałuje i tworzy wiązania wodorowe z grupami hydroksylowymi monomerów glukozy w celulozie. To sprawia, że barwnik znajduje się w pobliżu celulozy i sprzyja dodatkowym interakcjom van der Waalsa, prowadząc do stabilnego kompleksu barwnik-celuloza.
Przenieś sekcje trzpienia na szklane szkiełko i zamontuj szkiełko nakrywkowe. W świetle ultrafioletowym cząsteczki barwnika związane z celulozą fluoryzują na jasnobiało.
Komórki naskórka, kory i rdzenia wykazują intensywną fluorescencję, z wyraźnie zaznaczonymi konturami ścian komórkowych, ze względu na wysoką zawartość celulozy. Dla porównania, komórki ksylemu i włókien międzypęczkowych słabo fluoryzują, co może sugerować niewystarczającą dyfuzję barwnika z powodu obecności ligniny.
W przypadku barwienia bielą kalkofluoru przenieś sekcje łodygi do probówki mikrowirówki i dodaj jeden mililitr 0,02% białego roztworu kalkofluoru. Delikatnie odpipetować roztwór w górę i w dół. Przystąp do inkubacji i umyj sekcje zgodnie z opisem w protokole tekstowym przed obserwacją skrawków w świetle UV.