$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Ściana komórkowa prątków zawiera różne warianty kwasów mykolowych - długołańcuchowych kwasów tłuszczowych z konserwatywnymi łańcuchami alfa. Istnieją różnice strukturalne w ich łańcuchach beta, co skutkuje zmianami w polarności różnych kwasów mykolowych.
Aby oddzielić warianty za pomocą chromatografii cienkowarstwowej lub TLC - techniki chromatografii cieczowej - należy pobrać lipidy ściany komórkowej prątków w pożądanym rozpuszczalniku organicznym. Znajdź lipidy w pobliżu podstawy płytki TLC wstępnie pokrytej cienką warstwą materiału adsorpcyjnego, który działa jako faza stacjonarna.
Umieścić płytkę w słoiku zawierającym rozpuszczalnik organiczny - fazę ruchomą - upewniając się, że poziom cieczy znajduje się poniżej plamek próbki, aby zapobiec przedwczesnej dyfuzji kwasów mykolowych.
Podczas przebiegu faza ruchoma unosi się przez maleńkie pory warstwy adsorpcyjnej na płytce poprzez działanie kapilarne. W końcu kwasy mykolowe rozpuszczają się w rozpuszczalniku i przemieszczają się w górę.
Bardziej polarne warianty kwasu mykolowego są przejściowo adsorbowane przez polarną fazę stacjonarną poprzez siły międzycząsteczkowe, co utrudnia ich ruch w górę. Mniej polarnych kwasów mykolowych pozostaje w niepolarnej fazie ruchomej i migruje dalej.
Różnice w migracji powodują, że warianty kwasu mykolowego rozdzielają się na dyskretne pasma.
Po zakończeniu spryskaj wysuszoną płytkę barwnikiem z kwasu fosfomolibdenowego. Podgrzej płytkę, aby zredukować plamę w obecności lipidów, nadając pasmom ciemnozielony kolor.
Aby przeanalizować próbki za pomocą TLC, przykryj jedną ścianę komory TLC kawałkiem bibuły filtracyjnej. Dodaj wazelinę na rogi komory, aby uszczelnić komorę. Zdekantować mieszaninę rozpuszczalników na bibułę filtracyjną i dodać pozostałą objętość rozpuszczalnika na dno komory TLC. Zamknij komorę TLC na co najmniej 20 minut, aby ją nasycić
W międzyczasie rozpuść lipidy w szklanej probówce w 200 do 1,000 mikrolitrów chloroformu i użyj szklanej rurki kapilarnej, aby nałożyć 10 mikrolitrów zawiesiny lipidowo-chloroformowej bezpośrednio na płytkę TLC. Po pozostawieniu próbki do wyschnięcia przez pięć minut, włóż płytkę do nasyconej komory TLC i pozwól, aby faza ruchoma przepływała przez TLC.
Gdy rozpuszczalnik osiągnie 1 centymetr od górnego końca płytki, umieść płytkę pod strumieniem laminarnym, aż krzemionka całkowicie wyschnie. Następnie spryskaj wysuszoną płytkę 15 do 20 mililitrami 10% hydratu kwasu molibdatofosforowego w etanolu, aż płytka stanie się jasnożółta, i podgrzewaj płytkę przez dwie do pięciu minut w temperaturze 120 stopni Celsjusza.