Oczyszczanie bakulowirusa oparte na chromatografii powinowactwa heparyny: technika izolowania bakulowirusa z supernatantu komórek owadów

Bakulowirusy - dwuniciowe wirusy DNA - są otoczone otoczką zawierającą główne glikoproteiny wirusowe, takie jak GP64.

Aby wyizolować bakulowirusy z supernatantu hodowli komórkowej zawierającego szczątki komórkowe i białka zanieczyszczające, należy złożyć kolumnę chromatografii powinowactwa heparyny zawierającą matrycę usieciowanych kulek agarozy. Kulki te są sprzężone z heparyną, liniowym polisacharydem z grupami siarczanowymi, które nadają łańcuchowi heparyny ładunek ujemny.

Zrównoważyć kolumnę buforem płuczącym o neutralnym pH i optymalnej sile jonowej, aby zapewnić korzystne warunki dla maksymalnych interakcji bakulowirusa i heparyny podczas ładowania supernatantem. Załadować supernatant zawierający bakulowirusa do kolumny.

Podstawowe aminokwasy w bakulowirusie GP64 ułatwiają niespecyficzne oddziaływania elektrostatyczne z ujemnie naładowaną heparyną i ściśle wiążą się z kolumną, w przeciwieństwie do zanieczyszczeń, które wiążą się luźno. Przepłukać kolumnę buforem do płukania, usuwając niezwiązane i luźno związane białka i zanieczyszczenia.

Przepuścić przez kolumnę bufor elucyjny o wyższej sile jonowej niż bufor do płukania. Wyższa siła jonowa zakłóca oddziaływania elektrostaty