Chromatografia cieczowa oddziaływań hydrofilowych: technika rozdzielania hydrofilowych analitów polarnych za pomocą kulek hydrofilowych

Chromatografia cieczowa oddziaływań hydrofilowych, HILIC, to technika rozdzielania hydrofilowych związków polarnych na podstawie ich stopnia polarności. Zacznij od ustawienia kolumny HILIC wypełnionej hydrofilowymi kulkami przenoszącymi polarne grupy funkcyjne.

Najpierw kondycjonuj kolumnę za pomocą buforu równoważącego i fazy ruchomej - mieszaniny rozpuszczalnika organicznego i wody. Cząsteczki buforowe stabilizują pH, podczas gdy rozpuszczalnik organiczny nasyca kolumnę. Cząsteczki wody unieruchamiają się i tworzą warstwę wodną nad kulkami hydrofilowymi.

Załadować próbkę zawierającą mieszaninę glikanów - hydrofilowych związków polarnych - oznaczoną znacznikiem fluorescencyjnym. Przeprowadzić próbkę za pomocą ruchomego gradientu fazowego przez kolumnę przy optymalnym natężeniu przepływu.

Gdy próbka przemieszcza się wzdłuż hydrofobowej fazy ruchomej, glikany migrują do warstwy wodnej, pozostawiając zanieczyszczenia. Następnie glikany przemieszczają się w kierunku polarnych grup funkcyjnych na koralikach. Tutaj bardziej polarne glikany wiążą się silnie, podczas gdy mniej polarne wiążą się luźno.

Wraz ze spadkiem hydrofobowości fazy ruchomej, słabo związane glikany o mniejszej polarn