Chromatografia wykluczania wielkości Separacja pęcherzyków zewnątrzkomórkowych bakterii: technika oddzielania heterogenicznej populacji pęcherzyków błony zewnętrznej bakterii Gram-ujemnych na podstawie ich wielkości

W odpowiednich warunkach hodowli bakterie Gram-ujemne uwalniają pęcherzyki błony zewnętrznej przenoszące ładunek (OMV) do supernatantu. Pęcherzyki te są niejednorodnymi, małymi, kulistymi strukturami, które pośredniczą w komunikacji komórkowej.

Aby frakcjonować subpopulacje OMV o różnej wielkości, należy wziąć pustą kolumnę chromatograficzną wykluczającą wielkość z odpowiednim filtrem u podstawy, aby podeprzeć matrycę.

Wypełnij kolumnę żelową matrycą filtracyjną składającą się z chemicznie obojętnych, kulistych kulek o określonej wielkości porów, upewniając się, że rozmiar jest optymalny, aby wykluczyć przedostawanie się dużych OMV. Zrównoważyć kolumnę odpowiednim buforem, aby zapobiec wysychaniu kulek w celu optymalnego oczyszczenia.

Załaduj supernatant kultury bakteryjnej zawierający różnej wielkości subpopulacje OMV, agregatów białkowych i kwasów nukleinowych na wierzch kolumny. Pozwól próbkom płynąć pod wpływem siły grawitacji.

Gdy próbki przechodzą przez kolumnę, większe OMV, które nie mogą dostać się do porów, przemieszczają się przez przestrzenie międzycząsteczkowe między kulkami żelu, aby zostać najpierw wymyte. Tymczasem mniejsze OMV wnikają w pory matrycy, pokonują dłuższ