JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:05 min. • July 8th, 2025
Bakteryjne integralne białka błonowe, zakotwiczone w dwuwarstwowych błonach lipidowych, ułatwiają transport cząsteczek przez błony i transdukcję sygnałów. W badaniach strukturalnych specyficzne integralne białka rekombinowane błonowe ulegają nadekspresji ze stopionym zielonym białkiem fluorescencyjnym, GFP.
Aby ocenić stabilność rekombinowanego białka błonowego po rozpuszczalności detergentu, należy uzyskać bakteryjną frakcję błonową zawierającą integralne białka błonowe znakowane GFP. Dodaj niejonowy detergent. Po przekroczeniu stężenia krytycznego detergent tworzy micele.
Micele oddziałują z błonami lipidowymi i białkami błonowymi, rozpuszczając błony i tworząc kompleksy białkowo-detergentowe. Ponadto hydrofobowe regiony transbłonowe białek błonowych mogą pozostać niezamaskowane, powodując agregację białek. Ponadto w wyniku degradacji białek błonowych mogą powstawać wolne GFP.
Odwirować mieszaninę. Zebrać sopikowany detergentem supernatant zawierający frakcję.
Zmontować kolumnę chromatograficzną z wykluczeniem wielkości połączoną z detektorem fluorescencyjnym. Matryca kolumny składa się z kulek agarozy o rozmiarach porów określających szeroki zakres frakcjonowania.
Zrównoważyć ko
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych