Chromatografia powinowactwa oparta na DFE: technika oczyszczania przeciwciał monoklonalnych 2F5 z surowej próbki przy użyciu warunków elucji opartych na wysokiej sile jonowej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:41 min. • July 8th, 2025
DFE lub DsRed-2F5-Epitope to rekombinowane białko fuzyjne składające się z DsRed, białka fluorescencyjnego i epitopu 2F5 - segmentu antygenu glikoproteinowego otoczki HIV-1. Ten epitop ma wysokie powinowactwo do swojego paratopu - regionu w regionie determinującym komplementarność przeciwciała monoklonalnego 2F5.
Aby oczyścić przeciwciała monoklonalne 2F5 z surowej próbki, należy pobrać kolumnę wypełnioną porowatymi kulkami żywicy zawierającymi na swojej powierzchni unieruchomione ligandy powinowactwa DFE. Przepłukać kolumnę odpowiednim buforem równoważącym, aby utrzymać pH i zapobiec niespecyficznym interakcjom między składnikami próbki a żywicą w kolejnych etapach.
Załadować do kolumny próbkę zawierającą docelowe przeciwciała monoklonalne 2F5. Stopniowo przeciwciała w próbce zaczynają przepływać przez kolumnę lub fazę stacjonarną.
Podczas przepływu przeciwciała oddziałują odwracalnie z ligandami powinowactwa DFE unieruchomionymi w fazie stacjonarnej. W tych interakcjach paratop przeciwciała 2F5 wiąże się specyficznie ze swoim komplementarnym epitopem na ligandzie DFE.
Przemyć kolumnę buforem równoważącym w celu usunięcia niepożądanej próbki związanej niespecyficznie z kolumną. Pr
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych