Chromatografia gazowa w przestrzeni nadpowierzchniowej: technika oceny stężenia etanolu w zarodkach danio pręgowanego

Aby przeanalizować stężenie etanolu - lotnego związku organicznego, należy rozpocząć od pobrania homogenizowanego supernatantu z hodowli zarodków danio pręgowanego traktowanego etanolem w fiolce chromatograficznej. Supernatant zawiera oprócz etanolu inne nielotne związki organiczne. Umieścić szczelnie zapieczętowaną fiolkę w próbniku zestawu chromatograficznego i podgrzać ją do odpowiedniej temperatury.

Podczas ogrzewania etanol odparowuje i migruje do fazy gazowej lub przestrzeni nad głową, pozostawiając nielotne pozostałości. Dzięki temu próbnik może wprowadzać gazowy etanol do ciągłego strumienia gazu nośnego. Działa to jak faza mobilna.

Etanol przechodzi przez wstępnie podgrzaną spiralną kolumnę chromatograficzną, która zawiera wypełnione złoże ciekłej fazy stacjonarnej. Ze względu na swoją lotność i polarność poruszające się cząsteczki etanolu zaczynają adsorbować się nad cząstkami fazy stacjonarnej, dzieląc się na fazę stacjonarną.

Ze względu na wysoką temperaturę kolumny adsorpcja cząsteczek etanolu jest niestabilna i tymczasowa, co pozwala cząsteczkom na stopniową desorpcję i migrację wzdłuż przepływu gazu nośnego. Te cząsteczki etanolu podlegają serii zdarzeń adsorpcji-desorpcji na całej długości kolumny.

Następnie etanol trafia do komory detekcyjnej, która pomaga określić jego stężenie w próbce odpowiadającej obszarowi pod krzywą w wynikowym chromatogramie.

Użyj dwóch mikropipet p200 ustawionych na 50 mikrolitrów i odessaj roztwór koktajlu proteazy do jednej, a wody do drugiej. Następnie szybko umieść 10 zarodków w 1,5-mililitrowej probówce do mikrowirówki za pomocą szklanej pipety i zamknij nakrętkę. Powtórz ten proces dla wszystkich próbek, które mają być badane, kontroli i zarodków poddanych działaniu etanolu.

Pracując z jedną próbką na raz, szybko otwórz nakrętkę i odessaj wszystkie resztki pożywki zarodkowej za pomocą mikropipety p200 ustawionej na 200 mikrolitrów. Szybko, ale delikatnie, dodaj i usuń 50 mikrolitrów wody, a następnie dodaj 50 mikrolitrów koktajlu proteazy i zamknij nakrętkę tubki.

Pozostaw próbkę na 10 minut w temperaturze pokojowej, a następnie szybko dodaj 450 mikrolitrów 5-molowego chlorku sodu i zamknij nakrętkę probówki. Homogenizować próbkę przez wirowanie przez 10 minut i przenieść 2 mikrolitry supernatantu do fiolki do chromatografii gazowej. Uszczelnić fiolkę kapslem z politetrafluoroetylenu.

Po zakończeniu metody rozruchowej załaduj 436 Prąd spme etanol 2013 3-minutowy absorpcja 2_5min rg bieg. METH z menu Methods (Metody) w oprogramowaniu analitycznym dla każdej próbki z listy próbek. Wypełnij listę próbek, zaczynając od powietrza, wody i 5 półfabrykatów koktajlowych z proteazą molowo-chlorkowo-sodową. Następnie wprowadź wzorce etanolu w kolejności od 0,3125 do 40 milimolów.

Postępuj zgodnie ze standardami z drugą rundą półfabrykatów. Wprowadzić wszystkie homogenizowane próbki supernatantu zarodka do badania, od najniższego do najwyższego przewidywanego stężenia etanolu, i zakończyć wprowadzaniem trzeciej rundy ślepych prób.

Dodać fiolki do chromatografii gazowej do automatycznego podajnika próbek w kolejności, w jakiej próbki zostały wprowadzone, i pozostawić je do ogrzania przez 10 do 15 minut. Następnie uruchom przykładowe przebiegi przy użyciu oprogramowania. Po zakończeniu wszystkich przebiegów aktywuj metodę zamykania, dodając końcową próbkę do listy próbek i uruchamiając tryb wstrzymania. METAMFETAMINA. Utwórz kopię zapasową wszystkich danych uzyskanych podczas przykładowego przebiegu.

Po zakończeniu metody zamykania kliknij Otwórz chromatogram i otwórz folder z wynikami. Próbki są automatycznie integrowane z tym programem. W wynikach upewnij się, że zostały zintegrowane właściwe szczyty. Po potwierdzeniu wszystkich próbek wydrukuj lub wyeksportuj wyniki.

Wykreślić na wykresie wysokość piku wzorców etanolu. Następnie oblicz wartości nachylenia, punktu przecięcia z osią Y i wartości R-kwadrat. Wartość alkoholu etylowego dla każdej próbki należy uzyskać, odejmując wysokość piku próbki od punktu przecięcia Y wzorców i dzieląc tę wartość przez nachylenie wzorców.

Aby obliczyć stężenie etanolu w zarodkach, należy obliczyć współczynnik rozcieńczenia dla każdej próbki i pomnożyć wartość próbki alkoholu etylowego przez ten współczynnik rozcieńczenia. Na koniec należy obliczyć próbki referencyjne podłoża, mnożąc wartość alkoholu etylowego w pożywce przez współczynnik rozcieńczenia równy 10.