JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:16 min. • July 8th, 2025
Fosfolipidy to złożone lipidy zawierające grupy fosforanowe. Cząsteczki te są hydrolizowane przez enzym zwany fosfolipazą.
Aby wykonać test aktywności fosfolipazy, weź emulsję z żółtka jaja bogatą w fosfolipidy, które działają jako substrat dla enzymu. Żółtko dodajemy do ciepłego roztworu agarozy zawierającego chlorek sodu, który zwiększa stabilność białek żółtka podczas kolejnych etapów.
Uzupełnij mieszaninę chlorkiem wapnia i barwnikiem fluorescencyjnym - rodaminą. Wlej mieszaninę na szalkę Petriego. Po zestaleniu fosfolipidy żółtka pozostają jednorodnie rozmieszczone w matrycy żelu agarozowego.
Za pomocą rurki utwórz w żelu odpowiednio oddalone studzienki. Dodać do studzienek surowe ekstrakty białkowe zawierające fosfolipazę o różnych stężeniach. Inkubować płytkę w temperaturze fizjologicznej.
Fosfolipaza z ekstraktu dyfunduje promieniście do żelu. Jony wapnia w żelu wiążą się z fosfolipazą, aktywując enzymy. Enzym ten rozszczepia fosfolipidy, wytwarzając wolne kwasy tłuszczowe. Cząsteczki rodaminy w żelu tworzą kompleks z uwolnionymi kwasami tłuszczowymi.
Po oświetleniu światłem ultrafioletowym obserwuj pojawienie się fluorescencyjnych halo wokół studni. Halo potwierdza obecnoś
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych