Test chiralności komórek w kształcie pierścienia: technika in vitro do określania chiralności wielokomórkowej na podstawie wyrównania komórek na mikrowzorcach w kształcie pierścienia

Aby określić chiralność komórek ssaków in vitro - odchylenie komórek w lewo i w prawo w celu wyrównania w orientacji w lewo lub w prawo w warunkach ograniczających - należy rozpocząć od specjalnie wyprodukowanych szkiełek pokrytych złotem na płytce wielodołkowej zawierającej pożywkę. Szkiełka składają się z mikrowzorów pierścieniowatych wysp fibronektyny sprzyjającej adhezji komórek, wypełnionych odporną na adhezję komórek samoorganizującą się monowarstwą.

Następnie wysiać odpowiednią objętość zawiesiny komórek ssaków na szkiełka i inkubować. Komórki adsorbują się na mikrowzorcach pierścieniowych zawierających fibronektynę. Otaczająca, samoorganizująca się monowarstwa zapobiega niespecyficznemu przyłączaniu się komórek poza granice pierścienia.

Wymień nośnik, usuwając wszystkie niepodłączone komórki, na nowy nośnik. Dodaj lek zakłócający działanie aktyny do jednego zestawu szkiełek i inkubuj.

Przylegające komórki namnażają się, rozprzestrzeniając się i przyjmując kształt leżących pod spodem wysp fibronektyny, jednocześnie reorganizując swoje włókna aktynowe w odpowiedzi na sygnały przestrzenne, które ograniczają monowarstwę komórki, promując stronnicze wyrównanie.

Teraz potraktuj s