Test wychwytu pęcherzyków zewnątrzkomórkowych: metoda wizualizacji i ilościowego określania wychwytu komórkowego pęcherzyków zewnątrzkomórkowych przy użyciu techniki obrazowania fluorescencyjnego 3D

Aby ułatwić komunikację komórkową, komórki wydzielają pęcherzyki zewnątrzkomórkowe, EV - nanostruktury otoczone błoną lipidową. Pojazdy elektryczne przewożą różne ładunki biologiczne, w tym makrocząsteczki i metabolity, w celu dostarczenia ich do komórek biorcy.

Aby zobrazować wychwyt EV przez komórki za pomocą mikroskopii konfokalnej, najpierw weź świeżo wyizolowane EV. Te EV są wstępnie znakowane przeciwciałami związanymi z sondą fluorescencyjną w celu późniejszej łatwej wizualizacji.

Dodaj odpowiednią ilość znakowanych fluorescencyjnie EV do przylegającej hodowli komórek biorcy. Inkubuj przez żądany okres. Podczas inkubacji subpopulacja oznakowanych EV powierzchownie przyczepia się do powierzchni komórki, podczas gdy inne EV ulegają internalizacji.

Dodaj inny barwnik fluorescencyjny, aby oznaczyć cytoplazmę komórki, pomagając odróżnić zinternalizowane EV od tych przyklejonych do komórki biorczej. Umieść komórki pod mikroskopem konfokalnym i zobrazuj w różnych płaszczyznach ogniskowych wzdłuż osi z, uzyskując serię odcinków optycznych na całej grubości próbki.

Skompiluj tę kolekcję przekrojów optycznych - stos z - aby utworzyć trójwymiarowy obraz próbny o wysokiej rozdzielczości.