JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:03 min. • July 8th, 2025
W tkance żelazo, niezbędny minerał kluczowy dla różnych procesów metabolicznych, zwykle występuje w sekwestracji do hemoprotein i niehemowych białek żelaza. Hemoproteiny obejmują żelazo lub żelazo hemowe związane z pierścieniami porfiryny, podczas gdy białka żelaza niehemowego nie mają struktury pierścienia porfirynowego i zawierają głównie żelazo żelazowe lub niehemowe.
Aby oszacować zawartość żelaza niehemowego w tkance wątroby myszy, należy potraktować wysuszony, pobrany fragment tkanki wątroby myszy niskimi stężeniami kwasu solnego i kwasu trichlorooctowego. Inkubuj w wysokich temperaturach, aby strawić tkankę i ułatwić wytrącanie białek wywołane kwasem.
Ze względu na niskie stężenia kwasów, żelazo niehemowe jest uwalniane z powiązanych białek. Żelazo hemowe, będąc związane z pierścieniem porfiryny, pozostaje nienaruszone.
Po schłodzeniu przenieść żądaną objętość supernatantu zawierającego żelazo niehemowe na płytkę wielodołkową. Dodać chromogenny chelator żelaza, sulfonian batofenantroliny, BPS, uzupełniony kwasem tioglikolowym, środkiem redukującym, do odpowiedniego buforu i inkubować.
Kwas tioglikolowy redukuje całe żelazo niehemowe do żelaza żelazawego, które może łatwo wią
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych