JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:46 min. • July 8th, 2025
Osteoklasty, wielojądrzaste makrofagi, ułatwiają resorpcję kości - rozkład tkanki kostnej i uwalnianie minerałów kostnych.
Aby określić ilościowo resorpcję osteoklastów in vitro, należy wyhodować ludzkie komórki jednojądrzaste krwi obwodowej w czynniku stymulującym tworzenie kolonii makrofagów, M-CSF, zawierającym pożywkę do różnicowania w komórki progenitorowe osteoklastów i przyłączania. Zbierz progenitory osteoklastów i odwiruj.
Odpipetować zawieszoną zawiesinę komórkową w pożywce, uzupełnioną M-CSF i aktywatorem receptora liganda czynnika jądrowego kappa-Β, RANKL, do wielodołkowych studzienek płytkowych pokrytych fosforanem wapnia, naśladując nieorganiczny składnik kostny. M-CSF i RANKL powodują różnicowanie progenitorów osteoklastów i fuzję z osteoklastami, aktywując resorpcję.
Aktywowane osteoklasty przyczepiają się do powłoki fosforanu wapnia, reorganizując swój cytoszkielet, tworząc strefę uszczelniającą bogatą w aktynę i rozwijają pofałdowane granice, które wydzielają protony i hydrolazy kwasowe. Powstałe kwaśne środowisko rozpuszcza powłokę fosforanu wapnia, uwalniając jony wapnia i fosforanu i tworząc dół resorpcyjny.
Po inkubacji umyj studzienki, usuwając rozpuszczone j
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych