Test dwuwarstwowy lipidów ze sferycznym wsparciem: technika obserwacji składania się septyny na mikrosferach
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:02 min. • July 8th, 2025
Septyny są kluczowymi białkami cytoszkieletu, które wiążą się z zakrzywionymi powierzchniami błony plazmatycznej.
Aby zaobserwować in vitro składanie septyny na mikrosferach, najpierw weź zawiesinę mikroskopijnych kulek krzemionkowych o jednolitych rozmiarach, działających jako solidne podparcie dla tworzenia dwuwarstw. Odwiruj to zawiesinę, aby rozbić wszelkie skupiska koralików.
Uzupełnij go małymi pęcherzykami jednowarstwowymi, SUV - kulistymi pęcherzykami otoczonymi pojedynczą dwuwarstwą lipidową. Inkubować przy ciągłym mieszaniu, zapobiegając osiadaniu mikrosfer.
Podczas inkubacji zewnętrzne grupy głów biegunowych ułatwiają adsorpcję SUV-ów na powierzchni hydrofilowej mikrosfery. Ta interakcja powoduje pękanie SUV-ów, a następnie fuzję lipidów SUV z zakrzywioną powierzchnią mikrosfery jako ciągłą warstwę, w wyniku czego powstaje sferyczna, podparta dwuwarstwa lipidowa, SLB.
Przemyć w celu usunięcia nadmiaru niezwiązanych lipidów i ponownie zawiesić w buforze reakcyjnym. Przenieś sferyczną zawiesinę SLB na mały obszar powierzchni pokrytej glikolem polietylenowym, aby zapobiec niespecyficznej adsorpcji. Dodać znakowaną fluorescencyjnie zawiesinę septyny do komory i inkubować.
Se
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych