Test mineralizacji in vitro: metoda kolorymetryczna do ilościowego oznaczania złogów wapnia w osteoblastach na substytucie przeszczepu kostnego przez barwienie i ekstrakcję czerwieni alizarynowej

Podczas regeneracji kości osteoblasty - komórki kościotwórcze - są rekrutowane do miejsca złamania, gdzie namnażają się i wydzielają osteoid - macierz kolagenową. Po okresie dojrzewania osteoblasty mineralizują osteoid poprzez regulowane odkładanie jonów wapnia i fosforanów, inicjując nową syntezę kości.

Aby określić ilościowo stopień mineralizacji osteoblastów in vitro, należy uzyskać pierwotną zawiesinę osteoblastów w odpowiednich podłożach. Wysiać zawiesinę na wielodołkową płytkę zawierającą porowate krążki substytutów przeszczepu kostnego i inkubować.

Dyski służą jako rusztowanie, umożliwiając adhezję i proliferację komórek.

Zastąp zużyte pożywki świeżymi pożywkami zawierającymi suplementy osteogenne. Inkubować przez dłuższy czas. Suplementy osteogenne stymulują osteoblasty do wytwarzania, a następnie mineralizacji macierzy kolagenowej.

Po utrwaleniu zabarwić zmineralizowaną matrycę roztworem czerwieni alizarynowej S, ARS. ARS, ujemnie naładowany barwnik, wiąże się z dodatnio naładowanymi jonami wapnia w matrycy, tworząc kompleks o czerwonym zabarwieniu. Usuń nadmiar plamy. Zobrazuj płytkę, aby wykryć czerwone złogi wapnia, sugerujące mineralizację osteoblastów.

Następnie dodaj