JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:38 min. • July 8th, 2025
Endotoksyna, Gram-ujemna toksyna bakteryjna obecna na błonie zewnętrznej, jest lipopolisacharydem, LPS, składającym się głównie z lipidów i polisacharydów, w tym lipidu A i antygenu O. Po uwolnieniu podczas infekcji jest rozpoznawany przez układ odpornościowy, wywołując reakcje zapalne oparte na cytokinach.
Aby oszacować zanieczyszczenie endotoksynami w nanopreparacie leku liposomalnego przy użyciu lizatu amebocytów Limulus, LAL, test, należy przygotować probówki reakcyjne, z których jedna zawiera lek, a druga zawiera lek wzbogacony znanym stężeniem endotoksyny.
Dodaj odczynnik LAL zawierający lizat białkowy uzyskany z kraba podkowiastego, Limulus polyphemus, komórek krwi lub amebocytów. Lizat zawiera nieaktywne proteazy serynowe - czynnik B, czynnik C, enzym proklotowy - oraz białko krzepnięcia żelu, koagulogen.
Zwiruj rurki i załaduj je do mętnościomierza, aby zmierzyć zmętnienie roztworów.
W obecności zanieczyszczającego LPS związanego z lekami liposomalnymi, wrażliwy na LPS czynnik C ulega autokatalitycznie aktywacji, która następnie rozszczepia i aktywuje czynnik B, który przekształca enzym prokrzepnięcia w enzym krzepnięcia. Ten aktywowany enzym rozszczepia wiązania peptydowe
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych