Test lizatu amebocytów żelowo-skrzepowych limulus: metoda wykrywania endotoksyn bakteryjnych w preparatach nanocząsteczkowych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 2:57 min. • July 8th, 2025
Zewnętrzna błona bakterii Gram-ujemnych zawiera endotoksyny zwane lipopolisacharydami lub LPS. LPS ma hydrofilową część oligosacharydową i hydrofobowy region lipidowy A.
Po wejściu do gospodarza białka wiążące LPS rozpoznają endotoksyny. Białka te następnie wiążą receptory na krążących komórkach odpornościowych. To wiązanie aktywuje komórki odpornościowe, które uwalniają czynniki zapalne. Nadprodukcja tych czynników nasila odpowiedź immunologiczną, powodując śmierć komórki.
Aby wykryć endotoksyny za pomocą lizatu amebocytów Limulus lub testu LAL, należy pobrać preparat zawierający endotoksyny związane z lipofilową powierzchnią nanocząstek poprzez ich hydrofobowe porcje lipidu A.
Dodaj odczynnik LAL do probówki. Odczynnik ten jest wodnym lizatem zawierającym nieaktywne enzymy i białka pochodzące z amebocytów - komórek krwi kraba podkowiastego.
Inkubuj probówkę, aby ułatwić wiązanie endotoksyn z proenzymem nieaktywnego czynnika krzepnięcia C pochodzącego z lizatu, aktywując go autokatalitycznie.
Aktywowany czynnik C rozszczepia inny proenzym, czynnik B, tworząc proteazę, która rozszczepia enzym prokrzepowy i przekształca go w aktywną formę - enzym krzepnięcia limulusa. Enzym ten rozs
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych