JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:39 min. • July 8th, 2025
Miozyna - białko motoryczne - ma globularną domenę głowy, która oddziałuje z aktyną - białkiem nitkowatym. Ta interakcja jest niezbędna do translokacji miozyny wzdłuż włókien aktynowych. Aby zbadać to wiązanie in vitro, należy przeprowadzić test odwróconej ruchliwości miozyny na aktynie na uwięzi powierzchniowej.
Aby rozpocząć, zmontuj komorę testową, umieszczając biotynylowany glikol polietylenowy - szkiełko nakrywkowe pokryte PEG na szkiełku mikroskopowym tak, aby powlekana powierzchnia była skierowana do wewnątrz, tworząc górną część komory.
Przepuścić przez komorę roztwór zawierający awidynę - glikoproteinę. Awidyna wiąże się z biotyną z dużym powinowactwem, co zwiększa adhezję aktyny. Następnie przepływaj w znakowanych biotyną włóknach aktynowych oznaczonych czerwonym fluoroforem. Ligand biotyny wiąże się z awidyną, unieruchamiając włókna na powierzchni szkiełka nakrywkowego.
Na koniec dodaj białka miozyny 5A znakowane zielonym fluorescencyjnym białkiem do buforu zawierającego cząsteczki trifosforanu adenozyny lub ATP. Dwugłowa miozyna 5A, zawierająca głowę wleczoną i prowadzącą, oddziałuje z unieruchomionymi włóknami aktyny. Tylna głowa miozyny wiąże się z ATP i odłącza się o
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych