JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:24 min. • July 8th, 2025
Adenozynotrifosforan (ATP), podstawowe źródło energii komórki, jest niezbędny dla różnych funkcji komórkowych. Pod wpływem stresu negatywnie wpływa to na wewnątrzkomórkowy poziom ATP, co sprawia, że ATP jest dobrym markerem dla metabolicznie aktywnych, żywotnych komórek.
Na początek umieść zawiesinę komórek nowotworowych w czarnościennej mikropłytce z przezroczystym dnem, aby zminimalizować rozpraszanie światła podczas pomiaru natężenia światła. Mikropłytka składa się z powłoki hydrożelowej, która zapobiega przyleganiu komórek do płytki, umożliwiając interakcję między komórkami i samoorganizację w organoidy nowotworowe - trójwymiarowe kultury tkankowe, które naśladują mikrośrodowisko guza.
Następnie potraktuj badanym związkiem. Badany związek oddziałuje z komórkami organoidowymi i, w zależności od jego potencjału hamującego wzrost, może zakłócać procesy metaboliczne wytwarzające energię, powodując wewnątrzkomórkowe wyczerpanie ATP.
Po obróbce dodaj jednoetapowy odczynnik składający się z detergentów, inhibitorów ATPazy, enzymu lucyferazy, substratu specyficznego dla lucyferazy, lucyferyny i jonów magnezu. Inkubuj przez żądany czas.
Detergent rozpuszcza błony komórkowe, powodując li
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych