JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 2:59 min. • July 8th, 2025
Nieprawidłowo sfałdowane białka jądrowe pozbawione określonej struktury trzeciorzędowej są znakowane małymi modyfikatorami podobnymi do ubikwityny, SUMO i cząsteczkami ubikwityny, które ułatwiają ich degradację przez układ proteolityczny, w tym układ ubikwityna-proteasom, UPS.
W kilku chorobach neurodegeneracyjnych dysfunkcja UPS powoduje akumulację i agregację nieprawidłowo sfałdowanych białek jądrowych, co prowadzi do śmierci neuronów.
Aby zbadać szybkość degradacji nieprawidłowo sfałdowanych białek jądrowych in vitro, należy potraktować kulturę przylegających komórek ssaków mieszaniną składającą się ze znakowanego fluorescencyjnie, nieprawidłowo sfałdowanego plazmidowego DNA kodującego białko i odczynnika do transfekcji.
Pomyślnie transfekowane komórki eksprymują znakowane fluorescencyjnie, nieprawidłowo sfałdowane białka o krótkim okresie półtrwania oznaczone sygnałem lokalizacji jądrowej. Po transporcie do jądra te nieprawidłowo sfałdowane białka ulegają SUMOylacji i ubikwitynacji i są przenoszone do UPS w celu degradacji i usunięcia białek.
Po inkubacji zastąpić pożywkę pożywką o niskiej fluorescencji zawierającą cykloheksymid. Cykloheksymid, cząsteczka przepuszczalna dla kom
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych