Test przeciwciał neutralizujących AAV na bazie komórek: technika kolorymetryczna do wykrywania przeciwciał neutralizujących przeciwko specyficznym wirusom związanym z adenowirusami w surowicy

Rekombinowane wirusy związane z adenowirusami, rAAV, genetycznie modyfikowane, bezotoczkowe, jednoniciowe wirusy DNA, są obiecującymi terapeutycznymi nośnikami genów.

rAAV przyłączają się do docelowych receptorów błony komórkowej i przechodzą endocytozę za pośrednictwem klatryny, ułatwiając dostarczanie genomu rAAV do jądra i ekspresję genów terapeutycznych. Jednak neutralizujące przeciwciała układu odpornościowego skierowane przeciwko rAAV wiążą się ze specyficznym epitopem rAAV, zakłócając wiązanie błony komórkowej, wnikanie komórkowe i transfer genów.

Aby wykryć przeciwciała neutralizujące przeciwko specyficznym rAAV w surowicy owczej, najpierw należy uzyskać odpowiednie stężenia rozcieńczonej surowicy. Dodaj rekombinowane AAV wyrażające ludzką fosfatazę alkaliczną łożyska, gen hPLAP. Pozwól przeciwciałom neutralizującym wiązać się i neutralizować AAV.

Przenieść tę mieszaninę do studzienek wielodołkowej płytki zawierającej przylegającą hodowlę ludzkich komórek nabłonkowych. Podczas inkubacji AAV ulegają endocytozie komórkowej. Transdukowane komórki wyrażają hPLAP związany z błoną komórkową. Jednak zneutralizowane AAV nie mogą dostać się do komórek.

Wyrzuć pożywkę ze studzienek.