JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:03 min. • July 8th, 2025
Homeostaza białek komórkowych lub proteostaza obejmuje regulację fałdowania i funkcji białek, a także degradację nieprawidłowo sfałdowanych białek. Podczas starzenia się maszyneria proteostazy zmniejsza się, powodując gromadzenie się i dalszą agregację nieprawidłowo sfałdowanych białek, co prowadzi do dysfunkcji komórek.
Aby określić związany z wiekiem spadek proteostazy, zacznij od zsynchronizowanych rozwojowo, dorosłych transgenicznych Caenorhabditis elegans.
Komórki mięśniowe tych robaków wyrażają białka z nieprawidłowo rozprężonymi powtórzeniami poliglutaminy lub polyQ, połączonymi ze znacznikiem fluorescencyjnym. Białka PolyQ są podatne na nieprawidłowe fałdowanie, a zatem po akumulacji mogą tworzyć agregaty.
Przenieść robaki na szkiełko mikroskopowe zawierające podkładkę agarozową i unieruchomić odpowiednią substancją chemiczną do obrazowania żywych komórek. Za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego wizualizuj mięśnie ścian ciała robaków w pewnym okresie czasu, aby określić jasne, fluorescencyjne sygnały ognisk, odpowiadające fluorescencyjnym agregatom polyQ.
W ciągu kilku dni, ze względu na spadek proteostazy związany z wiekiem, dochodzi do postępującej akumulacji agregatów pol
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych