Test koinkubacji bakterii: technika oparta na mikroskopii fluorescencyjnej do wizualizacji wewnątrzgatunkowej konkurencji bakteryjnej na poziomie pojedynczej komórki
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:55 min. • July 8th, 2025
Wewnątrzgatunkowa konkurencja między dwoma szczepami bakteryjnymi powoduje, że szczep inhibitora uwalnia toksyczne cząsteczki efektorowe, które zabijają populację docelową.
Aby zobrazować konkurencyjne interakcje między dwoma szczepami bakterii Gram-ujemnych, zacznij od kokultury składającej się ze szczepu inhibitora i szczepu docelowego w równych ilościach.
Oba szczepy są zaprojektowane tak, aby wyrażać różnokolorowe białka fluorescencyjne w celu wizualnego rozróżnienia ich podczas obrazowania. Skoncentruj kulturę, aby zmaksymalizować kontakt między komórkami między szczepami bakterii. Umieść wymieszaną kulturę na szkiełku nakrywkowym umieszczonym na dnie naczynia.
Umieść zestaloną podkładkę agarozową na miejscu, pozwalając bakteriom na unieruchomienie, i przykryj ją kolejnym szkiełkiem nakrywkowym. Inkubuj, aby umożliwić wzrost bakterii, symulując warunki stłoczenia bakterii.
Otoczka komórkowa szczepu hamującego zawiera wyspecjalizowany system wydzielniczy - system wydzielania typu szóstego lub T6SS. Składa się z kompleksu membranowego, płytki bazowej i rurki wewnętrznej otoczonej kurczliwą osłoną.
Po wykryciu kontaktu szczep inhibitora aktywuje T6SS, co powoduje skurcz osłonki i
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych