JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:32 min. • July 8th, 2025
W systemach biologicznych bliskość białka do jego specyficznego partnera jest kluczowym wyznacznikiem udanej interakcji białko-białko. Przy obecności małych cząsteczek hamujących białka te nie mogą się do siebie zbliżać, zakłócając ich interakcje.
Aby przebadać cząsteczki hamujące pod kątem zakłócania interakcji między dwoma białkami - opiekuńczym i ko-opiekuńczym - weź wielodołkową płytkę zawierającą różne małe cząsteczki. Uzupełnij studzienki koralikami donorowymi z ko-chaperonami przymocowanymi do ich powierzchni. Koraliki te zawierają fotouczulacze do oznaczania chemiluminescencji.
Dodaj zawiesinę kulek akceptorowych sprzężonych z sekwencjami peptydowymi pochodzącymi z białka opiekuńczego, które wiążą się specyficznie z ko-chaperonem. Koraliki zawierają barwnik na bazie tioksenu i fluorofory niezbędne do wizualizacji.
W studzienkach z cząsteczkami niehamującymi wysokie powinowactwo między peptydami wiążącymi białka opiekuńcze a koopiekuńczymi przyciąga kulki akceptorowe i donorowe. Podczas gdy kulki pozostają daleko, gdy obecne są inhibitory.
Korzystając z czytnika chemiluminescencyjnego, zbadaj interakcję. Po oświetleniu określoną długością fali, fotouczulacze kulkowe donorowe
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych