JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:48 min. • July 8th, 2025
Makrofagi to wyspecjalizowane komórki odpornościowe, które usuwają komórki ulegające apoptozie - zaprogramowanej śmierci komórki przez fagocytozę.
Aby ocenić pochłanianie komórek apoptotycznych, zacznij od szklanego szkiełka zawierającego utrwalone komórki embrionalne Drosophila, w tym ciała apoptotyczne pochłonięte przez hemocyty - makrofagi bezkręgowców.
Najpierw potraktuj komórki odczynnikiem blokującym, który blokuje niespecyficzne miejsca. Dodaj przeciwciała pierwszorzędowe, które wiążą receptory croquemort - markery fagocytarne hemocytów. Zmyj nadmiar przeciwciał.
Dodaj przeciwciała drugorzędowe znakowane fosfatazą alkaliczną, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi. Teraz dodaj odpowiedni roztwór substratu chromogennego na szkiełko i inkubuj. Podczas inkubacji fosfataza alkaliczna reaguje z substratem chromogennym, dając fioletowo zabarwione granulki w hemocytach.
Następnie dodaj mieszaninę reakcyjną zawierającą końcową deoksynukleotydylotransferazę, enzym TdT i nukleotydy związane z digoksygeniną. TdT katalizuje przyłączanie nukleotydów związanych z digoksygeniną do odsłoniętych końców 3' OH rozdrobnionego DNA w ciałach apoptotycznych.
Następnie dodaj przeciwciał
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych