Test nieszczelności fluorescencji w celu zbadania interakcji peptydu przenikającego przez komórkę z błoną
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 2:58 min. • July 8th, 2025
Peptydy penetrujące komórki, CPP, krótkie, dodatnio naładowane peptydy, mogą wchodzić w interakcje z błonami komórkowymi i przenikać przez nieprzepuszczalne dla komórek, ułatwiając dostarczanie ładunków nieprzepuszczalnych dla komórek.
Aby zbadać potencjał przepuszczalności błony testowego CPP in vitro przy użyciu naśladownictwa błony komórkowej, należy rozpocząć od dużego pęcherzyka jednowarstwowego, zawiesiny LUV.
LUV składają się z dwuwarstwy fosfolipidowej wypełnionej nieprzepuszczalną dla błony sondą fluorescencyjną i odpowiednią parą wygaszaczy. W pęcherzykach wygaszacz oddziałuje z sondą fluorescencyjną ze względu na ich bliskie sąsiedztwo, powodując wygaszanie fluorescencji.
Odpipetować zawiesinę LUV do kwarcowej kuwety fluorescencyjnej i rozcieńczyć za pomocą buforu. Dodaj pasek magnetyczny. Przenieść do spektrofluorometru z mieszaniem magnetycznym, aby zapobiec sedymentacji LUV podczas pracy. Określ fluorescencję tła, aby wyeliminować wszelkie wycieki LUV.
W regularnych odstępach czasu dodawaj żądane stężenie CPP do zawiesiny LUV.
Opierając się na hydrofobowości i ładunku reszt aminokwasowych CPP, zaburzają błonę lipidową LUV, prowadząc do penetracji błony i przepuszczaln
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych