JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 5:09 min. • July 8th, 2025
Aby określić ilościowo zawartość rozpuszczalnego białka w tkance roślinnej, w probówce, zacznij od odpowiedniej ilości zmielonej, liofilizowanej tkanki roślinnej.
Dodaj wodorotlenek sodu, zasadę, do probówki i sonicate. Środowisko alkaliczne pod wpływem sił mechanicznych rozrywa pracę komórek, uwalniając zawartość wewnątrzkomórkową, w tym makrocząsteczki - rozpuszczalne białka i węglowodany. Inkubować w wyższych temperaturach.
W obecności ciepła zasady powodują hydrolizę białek, tworząc mniejsze peptydy i zwiększając rozpuszczalność białek. Dodatkowo dochodzi do degradacji węglowodanów.
Odwirować mieszaninę. Zebrać rozpuszczony supernatant zawierający białko. Dodaj kwas solny, aby zneutralizować pH.
Poddać próbkę działaniu kwasu trichlorooctowego, TCA. TCA zaburza powłokę hydratacyjną otaczającą białka, prowadząc do agregacji i wytrącania białek.
Odwirować i usunąć supernatant zawierający TCA. Umyj osad białkowy lodowatym acetonem, aby usunąć wszelkie pozostałości TCA, które mogą zakłócać ocenę rozpuszczalnego białka.
Wysuszyć aceton na powietrzu. Zawiesić osad białkowy w wodorotlenku sodu. Rozcieńczyć wodą dejonizowaną. Przenieś do dołków płytki wielodołkowej.
Dodaj kwaśny roztwór
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych