JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:57 min. • July 8th, 2025
U danio pręgowanego drobny pył zawieszony w otoczeniu lub PM – zanieczyszczenie powietrza – powoduje nieprawidłowe funkcjonowanie serca wywołane stresem oksydacyjnym.
Aby zbadać wpływ PM na danio pręgowanego, zacznij od wystawienia zarodków danio pręgowanego na pochodzącą z PM, ekstrahowalną materię organiczną, EOM, która wyzwala wytwarzanie reaktywnych form tlenu lub ROS.
ROS utlenia zasadę DNA guaninę do 8-hydroksy-2′-deoksyguanozyny lub 8-OHdG i powoduje fosforylację histonu H2AX w celu utworzenia γH2AX - markera pęknięć podwójnej nici DNA.
Po ekspozycji wytnij serce danio pręgowanego i umieść je na szklanym szkiełku. Traktuj serce roztworem utrwalającym, który sieciuje białka, stabilizując strukturę komórkową.
Następnie dodaj odczynnik blokujący, aby zapobiec niespecyficznym miejscom wiązania. Dodaj przeciwciała pierwszorzędowe, które są skierowane przeciwko γH2AX i 8-OHdG w komórkach serca.
Następnie dodaj dwa różnokolorowe przeciwciała drugorzędowe znakowane fluorescencyjnie, które specyficznie wiążą się z regionem Fc odpowiedniego przeciwciała pierwszorzędowego. Na koniec wybarwić próbkę DAPI - barwnikiem specyficznym dla DNA - który wiąże się z niewielkim rowkiem sekwencji
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych