Test immunoenzymatyczny w celu weryfikacji chemicznie sprzężonych koniugatów przeciwciało-antygen
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 2:57 min. • July 8th, 2025
Aby wywołać odpowiedź immunologiczną, antygeny wiążą się z przeciwciałami, które są specyficzne dla receptorów endocytarnych obecnych na powierzchni komórek dendrytycznych lub DC - komórek prezentujących antygen - które pomagają w wychwytywaniu antygenów.
Utworzenie kompleksu przeciwciało-antygen jest kluczowym krokiem i można je osiągnąć in vitro poprzez chemiczne sprzężenie antygenu z przeciwciałem monoklonalnym ukierunkowanym na prąd stały.
Aby zweryfikować skuteczność procesu koniugacji, należy rozpocząć od płytki ELISA wstępnie pokrytej wychwyconymi przeciwciałami. Płytkę należy potraktować roztworem blokującym, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu antygenów z powlekaną powierzchnią.
Dodaj chemicznie usieciowane koniugaty przeciwciało-antygen do płytki i inkubuj. Specyficzny epitop antygenu oddziałuje z paratopem wychwyconego przeciwciała, tworząc kompleks przeciwciało-antygen-przeciwciało.
Następnie nałóż na płytkę trzeci zestaw przeciwciał połączonych z enzymem. Przeciwciała te wiążą się specyficznie z pierwszorzędowymi przeciwciałami obecnymi w koniugacie, umożliwiając jego wykrycie.
Dodaj bufor zawierający substrat chromogenny, aby uwidocznić koniugaty. Enzym przyłączony
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych