JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:04 min. • July 8th, 2025
Transportery aminokwasów to białka związane z błoną, które pośredniczą w przenoszeniu aminokwasów przez błony komórkowe, regulując ważne procesy komórkowe.
Aby zbadać wychwyt aminokwasów in vitro, należy wziąć hodowlę komórek zrębu pochodzących ze szpiku kostnego myszy. Odessać pożywkę wzrostową. Dodaj wstępnie podgrzany bufor uzupełniony glutaminą - aminokwasem - znakowanym radioaktywnym wodorem. Inkubować przez wymagany czas.
Wstępnie podgrzany bufor zapewnia fizjologiczną temperaturę i odpowiednie pH wymagane do komórkowego wychwytu glutaminy. Transportery glutaminy składają się z domen transportowych - odpowiedzialnych za translokację substratu poprzez kotransport sprzężony z jonami sodu - oraz domen rusztowania zakotwiczonych w błonie.
Domena transportowa wiąże się ze znakowaną radioaktywnie glutaminą wraz z jonami sodu z buforu. Po związaniu uwalnia cząsteczki do cytoplazmy. Jednocześnie domena transportowa przemieszcza wewnątrzkomórkowe jony sodu i obojętne aminokwasy na zewnątrz komórki, powodując homeostazę komórkową.
Przemyj komórki lodowatym buforem, kończąc reakcję i usuwając wszelkie zewnątrzkomórkowe znakowane radioaktywnie glutaminą. Dodaj roztwór detergentu. Deterge
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych