JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 2:29 min. • July 8th, 2025
Poziomy komórkowe pirogronianu – kluczowego produktu pośredniego w szlakach biochemicznych wytwarzających energię – można oszacować za pomocą testów kolorymetrycznych opartych na enzymach.
Aby określić poziom pirogronianu w komórkach Caenorhabditis elegans - niepasożytniczego nicienia - weź frakcję komórkową przygotowaną z dorosłych robaków zawierających pirogronian. Roztwór należy poddać obróbce, usuwając białka komórkowe i zebrać oczyszczoną frakcję komórkową — próbkę badaną — zawierającą pirogronian. Brak białek komórkowych zapewnia dokładne określenie poziomu pirogronianu.
Zacznij od dodania odczynnika roboczego zawierającego enzymy oksydazę pirogronianową i peroksydazę chrzanową oraz barwnika chromogennego. Inkubować mieszaninę w ciemności przez odpowiedni czas.
Podczas inkubacji oksydaza pirogronianowa reaguje z pirogronianem - jego substratem - wytwarzając nadtlenek wodoru jako produkt uboczny. Brak światła zapobiega spontanicznemu rozkładowi nadtlenku wodoru.
Peroksydaza chrzanowa katalizuje reakcję między nadtlenkiem wodoru a barwnikiem chromogennym, tworząc kolorowy produkt. Intensywność barwnego produktu reakcji jest wprost proporcjonalna do stężenia pirogronianu w próbc
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych