Test pirogronianowy do oceny poziomów pirogronianu we frakcjach komórkowych robaków

0 wyświetleń2:29 min • July 8th, 2025

Poziomy komórkowe pirogronianu – kluczowego produktu pośredniego w szlakach biochemicznych wytwarzających energię – można oszacować za pomocą testów kolorymetrycznych opartych na enzymach.

Aby określić poziom pirogronianu w komórkach Caenorhabditis elegans - niepasożytniczego nicienia - weź frakcję komórkową przygotowaną z dorosłych robaków zawierających pirogronian. Roztwór należy poddać obróbce, usuwając białka komórkowe i zebrać oczyszczoną frakcję komórkową — próbkę badaną — zawierającą pirogronian. Brak białek komórkowych zapewnia dokładne określenie poziomu pirogronianu.

Zacznij od dodania odczynnika roboczego zawierającego enzymy oksydazę pirogronianową i peroksydazę chrzanową oraz barwnika chromogennego. Inkubować mieszaninę w ciemności przez odpowiedni czas.

Podczas inkubacji oksydaza pirogronianowa reaguje z pirogronianem - jego substratem - wytwarzając nadtlenek wodoru jako produkt uboczny. Brak światła zapobiega spontanicznemu rozkładowi nadtlenku wodoru.

Peroksydaza chrzanowa katalizuje reakcję między nadtlenkiem wodoru a barwnikiem chromogennym, tworząc kolorowy produkt. Intensywność barwnego produktu reakcji jest wprost proporcjonalna do stężenia pirogronianu w próbce.

Po zakończeniu okresu inkubacji umieścić próbkę w czytniku płytek i zmierzyć absorbancję. Wygeneruj krzywą wzorcową, używając seryjnego rozcieńczania ze znanymi stężeniami pirogronianu.

Wykreślić zmierzoną wartość absorbancji badanej próbki na krzywej w celu określenia stężenia pirogronianu w badanej próbce.

Użyj zestawu do testów kolorymetrycznych, aby zmierzyć stężenie pirogronianu w badanych próbkach i przeprowadzić badania dwustronne.

Dodaj 10 mikrolitrów badanych próbek do różnych dołków 96-dołkowej płytki i dodaj 90 mikrolitrów odczynnika roboczego do każdej próbki. Inkubować pod przykryciem przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Następnie umieść płytkę w czytniku mikropłytek, aby zmierzyć absorbancję każdej studzienki przy 570 nanometrach.

Wykreślić krzywą wzorcową pirogronianu i obliczyć stężenia pirogronianu na podstawie krzywej wzorcowej, mnożąc każde stężenie przez 2,25.

11:43

Hiperspolaryzowana spektroskopia i obrazowanie metabolicznego rezonansu magnetycznego 13C

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

04:30

Test kolorymetryczny aktywności syntazy cytrynianu u Drosophila melanogaster

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

12:34

Oznaczanie zawartości celulozy krystalicznej w biomasie roślinnej metodą Updegraff

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

12:10

Stabilne profilowanie izotopowe strumieni metabolicznych produktów pośrednich u Caenorhabditis elegans w stadium rozwojowym i dorosłym

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:44

Test aktywności syntazy cytrynianu: Test kolorymetryczny do pomiaru aktywności syntazy cytazy mitochondrialnej w homogenacie tkanki Drosophila

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:08

Test kolorymetryczny do oznaczania ilościowego mleczanu w próbkach badanych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:39

Wykorzystanie izolowanych mitochondriów z minimalnych ilości mięśni szkieletowych myszy do wysokoprzepustowych pomiarów oddechowych na mikropłytkach

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:12

Izolacja mitochondriów z minimalnych ilości mięśni szkieletowych myszy w celu wysokoprzepustowych pomiarów oddechowych na mikropłytkach

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

14:55

Pomiar mitochondrialnego zużycia tlenu w przepuszczalnych włóknach Drosophila przy użyciu minimalnych ilości tkanki

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:35

Małoskalowe testy kolorymetryczne wewnątrzkomórkowego mleczanu i pirogronianu u nicienia Caenorhabditis elegans

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 29 sierpnia 2026